细胞名称

Hacat(人永生化角质形成细胞)(STR鉴定正确)

细胞别称

HaCAT; HACAT; Hacat

细胞货号

HZ-5680HC

来源

皮肤；自发永生；男性；62岁

细胞形态

上皮细胞样

细胞类型

正常细胞

生长特性

贴壁细胞

生物安全等级

1

培养条件

DMEM+10% FBS+1% P/S

培养环境

空气，95% ； 二氧化碳 (CO2)，5%

细胞简介

Hacat细胞来源于一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，是在体外培养后自然转化的永生化的人角质细胞，也是第一株永生化的表皮细胞。Hacat细胞角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性，可用于人表皮细胞角化的研究。

二、Hacat细胞培养操作

换液周期

2-3天

培养基体积

T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

传代比例

1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）

传代方法

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层；
4.将培养瓶放入37度培养箱消化；
5.消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化；
6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
8.补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；

注意事项

不同品牌胰酶消化时间差别较大，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。

三、Hacat细胞冻存操作

冻存液配方

92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格

200-300万/ml，1ml每管

冻存方法

1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案