BioTNT 甲基化检测技术服务

BioTNT 甲基化检测技术服务

      DNA突变会导致表型改变。然而，序列不变化，基因调控照样能发生，这就是表观遗传学的威力。DNA甲基化是表观遗传学中的重要组成部分，在维持正常细胞功能、遗传印记、胚胎发育中起着重要作用，也与多种癌症密切相关。

  脊椎动物的DNA甲基化通常发生在CpG岛中的胞嘧啶。CpG岛是CpG二核苷富集区域，GC含量大于50%，长约200-500 bp。甲基化是由DNA甲基转移酶所催化的，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶（5mC）。这样一个简单的生化反应却有着意想不到的严重后果。许多重要的过程如胚胎发育和细胞周期调控都与甲基化息息相关，而多个癌症也表现出异常的甲基化模式。甲基化的存在就像一个开关，在不需要基因表达的时候将基因的活性关闭；去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。

5-羟甲基胞嘧啶5-hydroxymethylcytosine（5-hmc）的分子式是C5H7N3O2，是5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosine,5mC)的羟基化形式，5-羟甲基胞嘧啶是TET家族的酶通过氧化5-甲基胞嘧啶（5-mC）产生的，被称为“第六种碱基”，可以调控基因表达的关闭，是一种重要的表观遗传修饰，可能与去甲基化过程有关，5-羟甲基胞嘧啶的具体作用机制还不明确。

甲基化是蛋白质和核酸的一种重要的修饰，调节基因的表达和关闭，与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关，是表观遗传学的重要研究内容之一。 最常见的甲基化修饰有DNA甲基化和组蛋白甲基化。

由于普遍认为DNA甲基化在多种疾病尤其是癌症中扮演着重要的角色，所以人们对表观遗传学研究寄予厚望，希望能从中发现新的诊断和治疗的生物标志物。

DNA甲基化研究有以下两大类实验路线，BioTNT 对此进行了以下比较：

第一类： 不进行亚硫酸盐处理，对样本进行酶切；

实验方法：采用样本抽提DNA 后，应用位点特异的甲基化酶和非甲基化酶进行样本的剪切，避免了亚硫酸盐处理；

后期采用QPCR 方式，对CPG 岛进行定量检测；

可以得到甲基化和非甲基化的含量比例；主要适用于少量样本，多位点的检测；

运用不同试剂盒，通过后期实时 PCR 数据用于确定 5-羟甲基胞嘧啶和 5-甲基胞嘧啶的数量。结果显示了所选组织中 5-羟甲基胞嘧啶水平的变化。

代表产品： Qiagen 甲基化PCR Array；

NEB 5-hmc 和5-mc 定量检测；

Biotnt 提供您进行甲基化CPG 岛甲基化含量和非甲基化含量检测的技术服务；

收费情况如下：

1. 样本抽提和处理费用，300元/样本；

2.单个CPG 岛，费用为150元/八孔双复数据；

新方法推荐：

不进行亚硫酸盐处理，对样本进行酶切，采用样本抽提DNA 后，应用位点特异的甲基化酶和 非甲基化酶进行样本的剪切，避免了亚硫酸盐处理；

后期采用QPCR 方式，对CPG 岛进行定量检测；

可以得到甲基化和非甲基化的含量比例；主要适用于少量样本，多位点的检测；

第一种方法，运用不同试剂盒，通过前期不同酶的处理，以及后期实时 PCR 数据用于确定 5-羟甲基胞嘧啶和 5-甲基胞嘧啶的数量。结果显示了所选组织中 5-羟甲基胞嘧啶水平的变化。

第一种：限制性酶切产物+QPCR 分析甲基化和非甲基化水平：

推荐一：采用Qiagen  EpiTect Methyl II DNA Restriction Kit (12)试剂盒，可以通过准备您的基因组DNA 样本，进行后期的QPCR；

使用试剂盒中提供的消化液，进行4种消化；methylation-sensitive restriction enzyme (Enzyme A)，消化的是甲基化位点；methylation-dependent restriction enzyme (Enzyme B) 消化的是非甲基化的DNA 序列；

推荐二：采用Biotnt 甲基化DNA 限制性酶切试剂盒，可以通过准备您的基因组DNA样本, 进行后期的QPCR；

通过检测（M0， Mu, Mm，Mum）的CT 值，可以计算出M% 和U%。

第二种：独特方法！

可以同时检测5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）和 5-甲基胞嘧啶（5-mC）的实验方法：

采用5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒，能对特定 DNA 位点内的 5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）和 5-甲基胞嘧啶（5-mC）进行定性及定量。这种酶学方法包括三步简单操作，利用了同裂酶 MspI 和 HpaII 对甲基化敏感性的不同。

简述三步操作如下：基因组 DNA 用 T4 噬菌体β-葡糖基转移酶和 UDP-葡萄糖处理,将所有的 5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）糖基化；用限制性内切酶 MspI 和 HpaII 消化 DNA，这两个同裂酶有不同的甲基化敏感性；然后用终点或实时 PCR 来定性和定量不同的甲基化状态。试剂盒的设计目的是简化甲基化分析,增加发现新生物靶标的可能性。

本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！