Human Chikungunya Virus IgM (CHIKV IgM) ELISA KIT

人基孔肯雅热病毒IgM(CHIKV IgM)ELISA检测试剂盒

产品简介：

基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起的一种感染。该病于1952年在坦桑尼亚首次被发现，其名称来源于基马孔德语中表示“身体扭曲变形”的词汇。由于基孔肯雅热迅速的地理范围扩张、反复暴发、缺乏有效的抗病毒治疗方法以及可能导致高发病率，该病已成为全球关注的公共卫生问题。基孔肯雅病毒与奥尼翁尼翁病毒（ONNV）密切相关，两者具有相似的遗传和临床特征。其症状包括发热和关节疼痛。这些症状通常在感染后两到十二天出现。其他症状可能还包括头痛、肌肉疼痛、关节肿胀和皮疹。症状通常在一周内得到改善；然而，偶尔关节疼痛可能会持续数月或数年。死亡率约为千分之一。幼儿、老年人以及患有其他健康问题的人群面临更严重疾病的风险。

实验原理：

本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被有人基孔肯雅热病毒抗原的微孔中，依次加入样本、阳性对照、阴性对照、HRP标记的二抗，中间经过温育和洗涤，用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样本中的人基孔肯雅热病毒IgM(CHIKV IgM)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），判断样本阴阳性。

实验类型： 间接法

检测范围：定性检测（特殊要求可定制）

灵敏度：-

别名：CHIKV IgM

保存温度： 2-8℃   有效期：6个月

样本类型： 血清、血浆、和其他生物液体

【检测原理】                                                 

尊敬的客户，感谢你选用本公司的产品。本产品适用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液、组织等样本中的人CHIKV IgM浓度。检测其他特殊样本请咨询本公司技术支持。试剂盒仅供科研使用。 使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。

本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗人CHIKV IgM单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS 或TBS 的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

【检测原理示意图】                                               

【试剂盒组成】                                                

【试验所需自备试验设备和器材】                                       

1. 酶标仪(450nm 检测波长滤光片，570nm 或 630nm 校正波长滤光片) 。

2. 洗板机（可调注液量，保证每孔 350μl 洗液而不溢出）。

3. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

4. 漩涡混合仪，振荡器及磁力搅拌器等。

【标本处理办法】                                                

1. 血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。

2. 血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。

3. 组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。

4. 细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。

5. 尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。

注：样品稀释的一般原则                                           

用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【操作步骤】                                                    

1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 

8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。